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酶標(biāo)儀檢測黃曲霉毒素B1檢測步驟
黃曲霉毒素B1屬于自然烈的致癌物質(zhì)。 它一般產(chǎn)生于玉米,花生,巴西堅果和棉花種子中。 鑒于這種霉菌毒素的毒性,對黃曲霉毒素B1的為2ppb,對黃曲霉毒素總量的為4ppb。
使用酶標(biāo)儀能夠快速而準(zhǔn)確的檢測谷物,飼料和其他食品中的黃曲霉毒素B1。
檢測原理
黃曲霉毒素B1檢測試劑盒應(yīng)用直接競爭酶聯(lián)免疫吸附原理。
(1)樣品提取液或黃曲霉B1標(biāo)準(zhǔn)品100ul與酶聯(lián)偶合物200ul,混合后取100ul,
(2)加入到抗體包被的微孔中等待15分鐘,
(3)洗板去除未參加抗原-抗體反應(yīng)的黃曲霉毒素B1,
(4)酶的底物100ul加入到微孔中,等待5分鐘,顏色變?yōu)樗{色,顏色的深淺與黃曲霉毒素B1的含量成反比,
(5)加入終止液100ul,顏色變?yōu)辄S色,
檢測步驟
1.取固體或液體樣品5ml,加入25ml 70%的甲醇,混勻3分鐘,靜止10分鐘,過濾,收集濾液,吸取100ul濾液加100ul分析緩沖液,混勻。
2.取出綠色的稀釋孔和無色的有抗體包被的稀釋孔各放入一個板架上。
3.吸取200ul酶聯(lián)偶合物加入到綠色的稀釋孔,再吸取100ul標(biāo)樣(0、2、5、20、50ppb),和100ul步驟1的待檢混合樣,混勻3次。
4.然后從300ul混合物中吸取100ul加入到無色的有抗體包被的稀釋孔中,靜止15分鐘。
5.將孔中的液體倒掉,用蒸餾水沖洗每個孔,將微孔倒置于紙巾上把水吸干。
6. 加入100ul底物,放置5分鐘,顏色變?yōu)樗{色。
7. 加入100ul終止液,顏色變?yōu)辄S色。
8. 上機檢測,(酶標(biāo)儀濾鏡450nm,示差濾鏡630nm)
9. 稀釋倍數(shù)f:1
10. 定量限:生奶0.002ug/kg,
11. 牛奶或花生醬≤20ug/kg,合格,
12. 計算公式:X= c*f
注:
1. 酶聯(lián)偶合物25ml :sensitive conjugate 底物15ml :substrate 終止液15ml :stop solution 分析緩沖液 15ml :assay buffer
2. 試劑盒在使用前恢復(fù)到室溫(18~30度),使用完畢后,放入2~8度冰箱冷藏
3. 標(biāo)樣中含有毒素,致癌性,使用時戴好橡膠手套、安全眼鏡、工作服等防護裝備
4. 在讀數(shù)前,微孔中應(yīng)沒有氣泡,否則影響分析結(jié)果
5. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) r ≥0.9850
6. 嚴格遵守規(guī)定的操作時間,否則導(dǎo)致數(shù)據(jù)不精確
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